Changes in Genotype and Fluconazole Susceptibility of Isolates from Patients with Candida glabrata in Tunisia

Changement de génotype et de sensibilité au fluconazole de souches de Candida glabrata en Tunisie

¹ Laboratoire de biologie moléculaire, parasitaire et fongique, Faculté de médecine, Université de Sfax, Tunisie
² Laboratoire de parasitologie-mycologie, Aix-Marseille Université, AP-HM, CHU Timone, Marseille, France

Correspondence and offprints: Ayadi Ali, Laboratoire de biologie moléculaire, parasitaire et fongique, Faculté de médecine, 3029 Sfax, Tunisie. E-mail: ali.ayadi@rns.tn

Received: 7 October 2013
Accepted: 1 April 2014

Abstract

Candida glabrata has emerged as an opportunistic pathogen of considerable importance in invasive and superficial infections. Aims. To analyze the development of fluconazole resistance in patients under treatment through epidemiological survey in our hospital. Patients and methods. Twenty two patients (89 clinical strains) were collected. Molecular typing of isolates was performed by polymorphic markers. Analysis of gene expression was realized by reverse transcriptase-real time polymerase chain reactions (RT-qPCR). Results. Genetic analysis showed that 63% persists with apparently unchanged strains (n=14). Among them, four showed fluconazole resistance development. A strain replacement was observed in 6 patients and two patients selected more resistant isolates during the course of treatment. An analysis of Candida glabrata cerebellar degeneration-related protein 1 (CgCDR1), Candida glabrata cerebellar degeneration-related protein 2 (CgCDR2) and Candida glabrata sterol 14 alpha-demetylase Erg 11 (CgERG11) expression revealed an over-expression in 10 resistant isolates. Conclusion. This study demonstrated that C. glabrata strain undergo frequent changes in vivo. The increase in CgCDR1 and CgCDR2 expression was the most mechanism associated with fluconazole resistance.

Résumé

Candida glabrata a émergé comme un pathogène opportuniste d’une importance considérable dans les infections invasives et superficielles. Objectifs. Etudier le développement de résistance au fluconazole et ses mécanismes chez des patients sous traitement antifongique. Patients et méthodes. Vingt-deux patients (89 souches cliniques) ont été suivis. Le typage moléculaire des isolats a été réalisé par quatre marqueurs polymorphes. L’analyse de l’expression des gènes a été réalisée par reverse transcriptase-real time polymerase chain reactions (RT-qPCR). Résultats. Pour 63 % des patients, les souches isolées étaient génotypiquement identiques (n = 14). Parmi eux, quatre ont développé une résistance au fluconazole. Un remplacement de souche a été observé chez 6 patients. Parmi eux, deux patients ont présenté une sélection d’isolats résistants. Une analyse de l’expression des gènes Candida glabrata cerebellar degeneration-related protein 1 (CgCDR1), Candida glabrata cerebellar degeneration-related protein 2 (CgCDR2) et Candida glabrata sterol 14 alpha-demetylase Erg 11 (CgERG11) a révélé une surexpression chez 10 isolats résistants. Conclusion. Cette étude a démontré que les populations de C. glabrata sont soumises à des fréquents changements in vivo. L’augmentation de l’expression des gènes CgCDR1 et CgCDR2 semble être associée à la résistance au fluconazole.